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      酶標(biāo)儀基本知識(shí)及其檢測原理

      更新時(shí)間:2024-06-13點(diǎn)擊次數(shù):1756

      酶標(biāo)儀基本知識(shí)及其檢測原理

       

       

      HBS-4009+HBS-4011.jpg


      酶標(biāo)儀有單波長和雙波長檢測功能有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長"就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450 nm492 nm進(jìn)行比色測定;而“雙波長"則除了用對顯色具最大吸收的波長即450 nm492 nm進(jìn)行比色測定外,同時(shí)用對特異顯色不敏感的波長如630 nm進(jìn)行測定,酶標(biāo)儀最后打印出來的吸光度則為二者之差。630 nm波長下得到的吸光度是非特異的,來自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,最好使用雙波長,且不必設(shè)空白孔。

       

      二、測定的吸光度范圍   

       

      通常,酶標(biāo)儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標(biāo)儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間,但現(xiàn)在基本上都做了拓寬,可達(dá)到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線性。如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2的吸光度測定范圍為0-3.5,而Multiskan Ascent的吸光度測定范圍(Abs)達(dá)0-4.0,在0-4.0范圍,線性誤差不超過±2.0%,在0.3-3.0吸光度范圍內(nèi),測定精密度CV小于±0.2%3.0-4.0 Abs范圍內(nèi),測定精密度CV小于士0.2%。因此,對于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍,主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。

       

      三、光學(xué)系統(tǒng)   

       

      酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為812通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導(dǎo)纖維,除測定通道外,有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道,每次測定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何,均可通過酶標(biāo)儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話,則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

       

      四、檢測速度   

       

      酶標(biāo)儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時(shí)間。檢測速度快,有利于提高檢測的精密度,即避免由于測定過程中,因測定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場上常見的酶標(biāo)儀檢測速度都非常快,通常在數(shù)秒鐘內(nèi),如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2MK-3檢測96孔只需2s(連續(xù)模式)或5s(步進(jìn)模式)。Multiskan Ascent為單通道檢測,亦只需9s(連續(xù)模式)或14s(步進(jìn)模式)。又如BioRad公司的Benchmark的檢測速度單波長為7s,雙波長為15s

       

      五、震板功能   

       

      酶標(biāo)儀的震板功能是指酶標(biāo)儀在對ELISA板孔進(jìn)行比色測定前對其進(jìn)行振蕩混勻,使板孔內(nèi)顏色均一。目前市場上常見的酶標(biāo)儀均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉(zhuǎn)等方式及振蕩幅度等任意調(diào)節(jié),如LabsystemsMK-2;有的則較為固定,如BioRad 550。使用有震板功能的酶標(biāo)儀,在進(jìn)行ELISA測定顯色反應(yīng)完成加入終止劑后,可不必振蕩混勻,直接放人酶標(biāo)儀上測定即可。

       

      六、溫育功能   

       

      溫育功能是指酶標(biāo)儀本身能按要求自動(dòng)精確地控制儀器內(nèi)部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內(nèi)部完成,而無需再外配溫箱。目前,只有少部分酶標(biāo)儀具有此種功能,如Labsystems公司的Multiskan AscentBioRad公司的BenchmarkBiotek公司的ElxS08等。溫育功能只是酶標(biāo)儀的一個(gè)附加功能,是否具有并不能說明酶標(biāo)儀檔次的高低及儀器的優(yōu)劣。作為實(shí)驗(yàn)室是否選擇,則可根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的條件及需要來決定。

       

       

       


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